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SWATH(Sequential Window Acquisition of all Theoretical fragment ions)是瑞士蘇黎世聯邦理工學院的 Ruedi Aebersold 博士及其團隊與 AB-SCIEX 于 2012 年聯合推出的一項全新的質譜采集模式技術。SWATH技術具有靈敏度高,重現性強,準確度高,高通量,線性動態范圍大等優點。傳統的質譜數據采集方式為數據依賴型(Data-dependent acquisition,DDA)采集方式也叫做 Shot-gun 法,在一級質譜掃描中,根據母離子的強度高低來選擇母離子進行串聯質譜的掃描,得到二級譜圖在蛋白數據庫進行搜索。這種掃描方式會丟失大量有用的譜圖,同時重復性較差。
SWATH 采集模式是一種新型的 MS/MS 掃描技術,屬于數據非依賴型采集方式(Data-independent acquisition,DIA)。DIA按照設定的方法,將所有的母離子都進行串聯質譜掃描。SWATH 根據酶解肽段的質荷比和洗脫時間來設計采集二級譜圖的離子窗口。以掃描范圍 400~1200 為例,m/z 25 作為一個掃描間隔(SWATH),每個 SWATH 掃描時間設定為100ms,那么該掃描范圍累計需要 32個掃描窗口,完成一次掃描僅需要 3.2秒。
SWATH流程圖如圖所示,分為以下幾個步驟:
1)蛋白質的提取,酶解和純化。
2)酶解后的肽段進行 shotgun檢測,用 proteinpilot進行數據庫檢索,得到蛋白定性
3)根據 shotgun 的檢測結果,確定 SWATH 的掃描間隔等質譜參數,進行樣本的 SWATH檢測,每個樣本重復檢測3次。
4) 用shotgun 的檢索結果建立離子譜圖庫,SWATH樣本檢測到的譜圖信息使用Peakview在離子庫中進行蛋白的匹配和定量信息的提取。
5)將Peakview導出的蛋白結果導入到 Makerview進行數據處理,得到蛋白定量結果。
威斯騰實驗服務流程
威斯騰生物服務項目
分子生物學檢測 | 蛋白質與免疫學 | 動物實驗 |
實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
免疫共沉淀(Co-IP) | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
ELISA(酶聯免疫吸附法)技術 | Western-blot 實驗服務 | 脊髓損傷模型 |
生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務 | 腦外損傷模型 |
雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經損傷模型 |
染色質免疫共沉淀(ChIP) | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質組學 | 心力衰竭模型 |
SLAC蛋白組學 | 肺動脈高血壓動物模型 | |
高血壓模型 | ||
病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
逆轉錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
腺相關病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
蛋白芯片 | 原代細胞培養 | 肝纖維化模型 |
細胞因子芯片 | 骨髓間充質干細胞培養 | 膽結石模型 |
BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養 | 急性胰腺炎模型 |
生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養 | 急性腎衰竭模型 |
炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養 | 體內血栓模型 |
血管生成因子芯片 | 血管內皮細胞培養 | 關節炎模型 |
凋亡因子芯片 | 神經元細胞培養 | I型和II型糖尿病模型 |
趨化因子芯片 | 內皮組細胞原代培養 | 裸鼠成瘤 |
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
電生理相關服務 | 動物整體實驗服務 | |
膜片鉗實驗 | ||
細胞生物學檢測 | 高通量測序 | 代謝組學 |
細胞原代培養 | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學相關實驗 |
Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
流式分選 | Small RNA測序 | 小動物活體成像 |
CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
藥物篩選細胞學實驗 | circleRNA測序 | |
細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
細胞生物學整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
細胞成管實驗 | ||
病理檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本) |
Tunel(原位末端凋亡法)檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片(限人和小鼠來源樣本) |
激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
免疫熒光 | ||
Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 | |
原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
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熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 |
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特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等) |
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|
行為學檢測 | 藥物篩選服務項目 | 藥效學評價 |
曠場實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學評價 |
重復性刻板行為檢測 | 細胞高內涵藥物篩選平臺 | 心血管系統藥物藥效學評價 |
動物跑臺檢測 | 蛋白質組學靶標研發平臺 | 泌尿系統藥物藥效學評價 |
強迫游泳 | 分子藥理研究平臺 | 內分泌系統藥物藥效學評價 |
生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 抗炎免疫藥物藥效學評價 | |
常規藥物體外篩選 |
【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學檢測、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!
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