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                    蛋白質組學
                    SWATH 定量蛋白質組學

                    時間:2020-07-20 14:49:00 瀏覽:13580次


                    SWATH(Sequential Window Acquisition of all Theoretical fragment ions)是瑞士蘇黎世聯邦理工學院的 Ruedi Aebersold 博士及其團隊與 AB-SCIEX 于 2012 年聯合推出的一項全新的質譜采集模式技術。SWATH技術具有靈敏度高,重現性強,準確度高,高通量,線性動態范圍大等優點。傳統的質譜數據采集方式為數據依賴型(Data-dependent acquisition,DDA)采集方式也叫做 Shot-gun 法,在一級質譜掃描中,根據母離子的強度高低來選擇母離子進行串聯質譜的掃描,得到二級譜圖在蛋白數據庫進行搜索。這種掃描方式會丟失大量有用的譜圖,同時重復性較差。

                    SWATH 采集模式是一種新型的 MS/MS 掃描技術,屬于數據非依賴型采集方式(Data-independent acquisition,DIA)。DIA按照設定的方法,將所有的母離子都進行串聯質譜掃描。SWATH 根據酶解肽段的質荷比和洗脫時間來設計采集二級譜圖的離子窗口。以掃描范圍 400~1200 為例,m/z 25 作為一個掃描間隔(SWATH),每個 SWATH 掃描時間設定為100ms,那么該掃描范圍累計需要 32個掃描窗口,完成一次掃描僅需要 3.2秒。


                    SWATH流程圖如圖所示,分為以下幾個步驟:

                    1)蛋白質的提取,酶解和純化。

                    2)酶解后的肽段進行 shotgun檢測,用 proteinpilot進行數據庫檢索,得到蛋白定性

                    3)根據 shotgun 的檢測結果,確定 SWATH 的掃描間隔等質譜參數,進行樣本的 SWATH檢測,每個樣本重復檢測3次。

                    4) 用shotgun 的檢索結果建立離子譜圖庫,SWATH樣本檢測到的譜圖信息使用Peakview在離子庫中進行蛋白的匹配和定量信息的提取。

                    5)將Peakview導出的蛋白結果導入到 Makerview進行數據處理,得到蛋白定量結果。

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                    實時熒光定量PCR 單克隆抗體制備 帕金森疾病模型
                    免疫共沉淀(Co-IP 多克隆抗體制備 抑郁癥動物模型
                    ELISA(酶聯免疫吸附法)技術 Western-blot 實驗服務 脊髓損傷模型
                    生化指標檢測 蛋白雙向電泳實驗服務 腦外損傷模型
                    雙熒光素酶報告基因檢測 原核蛋白表達純化 骨神經損傷模型
                    染色質免疫共沉淀(ChIP 真核蛋白表達純化 心肌缺血模型
                    GST pull Down ITRAQ定量蛋白質組學 心力衰竭模型
                    SLAC蛋白組學 肺動脈高血壓動物模型
                    高血壓模型
                    病毒包裝 實驗課題整體外包 粥樣動脈硬化模型
                    過表達/干擾慢病毒包裝純化 整體課題外包 大腦中動脈阻塞模型
                    過表達/干擾腺病毒包裝純化 細胞整體實驗外包 慢性之氣管炎模型
                    逆轉錄病毒包裝純化 動物整體實驗外包 過敏性哮喘模型
                    腺相關病毒包裝純化 肺炎大鼠模型
                    肝炎-肝硬化-肝癌模型
                    蛋白芯片 原代細胞培養 肝纖維化模型
                    細胞因子芯片 骨髓間充質干細胞培養 膽結石模型
                    BioPlex懸浮芯片 脂肪干細胞培養 急性胰腺炎模型
                    生長因子芯片 心肌成纖維細胞培養 急性腎衰竭模型
                    炎癥因子芯片 軟骨細胞培養 體內血栓模型
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                    HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 基因編輯動物
                    電生理相關服務 動物整體實驗服務
                    膜片鉗實驗
                    細胞生物學檢測 高通量測序 代謝組學
                    細胞原代培養 mRNA測序 氣相色譜GC/MS
                    MTT檢測 LncRNA測序 液相色譜LC/MS
                    細胞凋亡檢測 全基因組測序 核磁共震NMR
                    細胞周期檢測 RNA-Seq測序
                    細胞克隆形成實驗 外顯子測序 影像學相關實驗
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                    細胞生物學整體實驗 全基因敲除小鼠/大鼠
                    細胞成管實驗
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                    免疫組化 目的基因敲入細胞系 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本)
                    Tunel(原位末端凋亡法)檢測 報告基因敲入細胞系 SNP芯片(限人和小鼠來源樣本)
                    激光共聚焦 miRNA/LncRNA敲除細胞系
                    免疫熒光
                    Masson染色 CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
                    原位雜交 基因敲除大鼠/小鼠
                    熒光原位雜交 基因敲入大鼠/小鼠
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                    行為學檢測 藥物篩選服務項目 藥效學評價
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                    常規藥物體外篩選


                    【本平臺合作項目】
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