一、TUNEL 技術簡介：

TUNEL 技術, 即脫氧核苷酸末端轉移酶( Term inal2deoxynucleo t idyl t ran sferase, TdT )介導的x2dU TP 缺口末端標記(TdT 2m ediatedx2dU TP n ick end labeling, TUN EL ) 技術, 是目前原位檢測細胞凋亡最敏感、快速、特異的新方法, 已廣泛用于生物、醫學研究領域。

TdT-mediated dUTP-biotin nick end labeling (TUNEL)是一種用來檢測細胞凋亡(apoptosis)的分析方法.細胞凋亡有一項重要的特征為細胞內的DNA會碎裂成片段(DNA fragmentation),TUNEL可以有效的去探測DNA片段的產生,所以可以傳達細胞凋亡的訊息.TdT為terminal deoxynucleotidyl transferase,此種酵素可以在沒有DNA模板的情形下,連結核甘酸到DNA的3'-OH處.1992年,以色列科學家Gavrieli等人將TdT引為為標定DNA片段的一個酵素,自此衍生出TUNEL此項技術.TUNEL的好處是可以在細胞凋亡發生的早期,即可偵測到DNA片段的產生,并且可以直接使用在組織切片上,觀察細胞凋亡發生的位置.所以TUNEL目前為廣泛接受與使用的一種細胞凋亡的分析方法。

二、試劑與儀器

試劑

1．TUNEL試劑盒：購自羅氏公司

2．DAB：Sigma

3．PBS和TBS緩沖液：國藥集團

儀器

切片機：德國Leica，RM2145型

展片機：德國Leica，HI1210型

烤片機：德國Leica，HI1220型

三、操作流程

1、石蠟切片，常規脫蠟至水; 石蠟切片4um貼在涂有切片粘合劑的載玻片上，58。C烤24h，常規脫蠟至水，二甲苯Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ 各10分鐘，無水乙醇，95%，85%，75%乙醇，各2分鐘，水洗2分鐘。

2、0.3%H2O2作用 30min,室溫，PBS洗3min×3次；

3、Proteinase K 20ug/ml37℃20min

4、PBS洗3min×3次；

5、0.1%Triton×100 PBS洗3min×3次；

6、PBS洗3min×3次；

7、TUNEL混合液---1ml Tunel緩沖液中加入10ul b-11-DUTP, 10ul TDT,37C1h,室溫1h

8、PBS洗3min×3次；

9、Streptavidin-HRP 1:40037C30min

10、PBS洗3min×3次；

11、0.04%DAB+0.03%H2O2顯色10min，流水洗

12、蘇木精襯染1min，鹽酸乙醇分化，水洗

13、常規樹脂封片

四、結果提供：陽性結果為棕黃色（核）或棕褐色，背景呈紫藍色。

1、完整的實驗報告（包含試劑、耗材、操作步驟、病理結果）；

2、原始病理照片，一般提供100倍、400倍照片各2張；

3、如果客戶提供的是組織，我們提供包埋、染色片

五、樣本要求

取材保持組織新鮮（組織塊以小于2cm*1.5cm*0.3cm為宜），立即放入固定液（固定液用10%福爾馬林液或4%多聚甲醛緩沖液，體積為組織塊的10倍以上）中，避免干燥；對于有血跡的樣本，可用PBS液或生理鹽水沖洗后直接放入固定液中；經固定后的樣本必須在48小時內處理

結果展示

威斯騰實驗服務流程：

威斯騰生物服務項目

分子生物學檢測	蛋白質與免疫學	動物實驗
實時熒光定量PCR	單克隆抗體制備	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗體制備	抑郁癥動物模型
ELISA（酶聯免疫吸附法）技術	Western-blot 實驗服務	脊髓損傷模型
生化指標檢測	蛋白雙向電泳實驗服務	腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測	原核蛋白表達純化	骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表達純化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白質組學	心力衰竭模型
	SLAC蛋白組學	肺動脈高血壓動物模型
		高血壓模型
病毒包裝純化	實驗課題整體外包	粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化	整體課題外包	大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化	細胞整體實驗外包	慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化	動物整體實驗外包	過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代細胞培養	肝纖維化模型
細胞因子芯片	骨髓間充質干細胞培養	膽結石模型
生長因子芯片	脂肪干細胞培養	急性胰腺炎模型
信號通路磷酸化水平檢測芯片	心肌成纖維細胞培養	急性腎衰竭模型
BioPlex懸浮芯片	軟骨細胞培養	體內血栓模型
生長因子芯片	血管內皮細胞培養	關節炎模型
炎癥因子芯片	神經元細胞培養	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	內皮組細胞原代培養	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因編輯動物
趨化因子芯片	電生理相關服務	動物整體實驗服務
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片	膜片鉗實驗
細胞生物學	高通量測序	代謝組學
細胞原代培養	mRNA測序	氣相色譜GC/MS
MTT檢測	LncRNA測序	液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測	全基因組測序	核磁共震NMR
細胞周期檢測	RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗	外顯子測序	影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲	16s擴增子測序	Micro-CT
流式分選	Small RNA測序	小動物活體成像
CCK8/XTT檢測	宏基因組測序	核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性	單細胞測序	PET-CT
藥物篩選細胞學實驗	circleRNA測序
細胞粘附性檢測	甲基化測序	基因編輯動物
細胞劃痕實驗		條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學整體實驗		全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理學檢測	CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入	基因芯片
掃描電鏡	基因定點突變細胞系	LncRNA芯片
透射電鏡	單基因敲除細胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除細胞系	mRNA芯片
免疫組化	目的基因敲入細胞系	甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本）
Tunel（原位末端凋亡法）檢測	報告基因敲入細胞系	SNP芯片（限人和小鼠來源樣本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色	CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
原位雜交	基因敲除大鼠/小鼠
熒光原位雜交	基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等）
行為學檢測	藥物篩選服務項目	藥效學評價
水迷宮實驗	高通量自動藥物篩選平臺	神經系統藥物藥效學評價
曠場實驗	細胞高內涵藥物篩選平臺	抗腫瘤藥物藥效學評價
重復性刻板行為檢測	蛋白質組學靶標研發平臺	心血管系統藥物藥效學評價
動物跑臺檢測	分子藥理研究平臺	泌尿系統藥物藥效學評價
強迫游泳	生物膜片鉗藥物篩選平臺	內分泌系統藥物藥效學評價
	常規藥物體外篩選	抗炎免疫藥物藥效學評價

【本平臺合作項目】

分子生物學、細胞生物學、病理染色檢測、細胞敲除&敲入、模式與轉基因動物、SPF動物保種、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務！

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