一、熒光免疫測定技術

將試劑抗原或試劑抗體用熒光素進行標記，試劑與標本中相應的抗體或抗原反應后，測定復合物中的熒光素，這種免疫技術，稱為免疫熒光素技術。

二、常見熒光素

⑴FITC；⑵RB200；⑶TRITC；⑷鑭系：Eu、Tb；⑸PE；⑹其它。

三、實驗儀器與試劑

1、實驗儀器：染色缸5個，玻片架1個，微波爐，濕盒，37℃恒溫箱，錫箔紙

2、實驗試劑：二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、無水酒精、30%雙氧水、檸檬酸鹽緩沖液（粉末，制備時候用雙蒸水定容，調PH）、PBS、BSA（粉末，用PBS溶解）、一抗（可用BSA溶解）、二抗（可用BSA溶解）、甘油、丙酮、多聚甲醛、Triton X-100(用PBS制備)

四、實驗步驟

石蠟包埋切片處理方法：

1.二甲苯Ⅰ浸泡20分鐘

2.二甲苯Ⅱ浸泡20分鐘

3.梯度酒精（100、95、75）%脫水各5分鐘

4.雙蒸水沖洗浸泡1次，5分鐘

5.3%雙氧水浸泡，室溫5-10min，或37℃10min

6.抗原修復：切片浸入0.01M檸檬酸鹽緩沖液（PH6.0），微波爐加熱至沸騰后斷電。自然冷卻至室溫。

7.PBS沖洗2次，每次3分鐘

8.滴加5%BSA封閉液，室溫20min

9.甩去多余液體不洗

10.滴加適當稀釋的一抗，超過組織邊緣2mm，置于濕盒內4℃過夜或者37℃1小時或20℃2小時

11.取濕盒于37℃溫箱復溫，30min

12.滴加二抗，37℃溫箱孵育1小時（避光操作和存放）

13.PBS沖洗3次，每次2分鐘

14.甘油封片，甘油：水=1：1或甘油：PBS=9：1

15.4℃保存，最好及時激光共聚焦拍照

冰凍切片處理方法：

1.冰丙酮浸泡30s，自然晾干

2.滴加5%BSA封閉液，室溫20min

3.甩去多余液體不洗

4.滴加適當稀釋的一抗，超過組織邊緣2mm，置于濕盒內4℃過夜或者37℃1小時或20℃2小時

5.取濕盒于37℃溫箱復溫，30min

6.滴加二抗，37℃溫箱孵育1小時（避光操作和存放）

7.PBS沖洗3次，每次2分鐘

8.甘油封片，甘油：水=1：1或甘油：PBS=9：1

9.4℃保存，最好及時激光共聚焦拍照

結果展示

服務流程

威斯騰生物服務項目

分子生物學檢測	蛋白質與免疫學	動物實驗
實時熒光定量PCR	單克隆抗體制備	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗體制備	抑郁癥動物模型
ELISA（酶聯免疫吸附法）技術	Western-blot 實驗服務	脊髓損傷模型
生化指標檢測	蛋白雙向電泳實驗服務	腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測	原核蛋白表達純化	骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表達純化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白質組學	心力衰竭模型
	SLAC蛋白組學	肺動脈高血壓動物模型
		高血壓模型
病毒包裝純化	實驗課題整體外包	粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化	整體課題外包	大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化	細胞整體實驗外包	慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化	動物整體實驗外包	過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代細胞培養	肝纖維化模型
細胞因子芯片	骨髓間充質干細胞培養	膽結石模型
生長因子芯片	脂肪干細胞培養	急性胰腺炎模型
信號通路磷酸化水平檢測芯片	心肌成纖維細胞培養	急性腎衰竭模型
BioPlex懸浮芯片	軟骨細胞培養	體內血栓模型
生長因子芯片	血管內皮細胞培養	關節炎模型
炎癥因子芯片	神經元細胞培養	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	內皮組細胞原代培養	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因編輯動物
趨化因子芯片	電生理相關服務	動物整體實驗服務
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片	膜片鉗實驗
細胞生物學	高通量測序	代謝組學
細胞原代培養	mRNA測序	氣相色譜GC/MS
MTT檢測	LncRNA測序	液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測	全基因組測序	核磁共震NMR
細胞周期檢測	RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗	外顯子測序	影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲	16s擴增子測序	Micro-CT
流式分選	Small RNA測序	小動物活體成像
CCK8/XTT檢測	宏基因組測序	核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性	單細胞測序	PET-CT
藥物篩選細胞學實驗	circleRNA測序
細胞粘附性檢測	甲基化測序	基因編輯動物
細胞劃痕實驗		條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學整體實驗		全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理學檢測	CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入	基因芯片
掃描電鏡	基因定點突變細胞系	LncRNA芯片
透射電鏡	單基因敲除細胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除細胞系	mRNA芯片
免疫組化	目的基因敲入細胞系	甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本）
Tunel（原位末端凋亡法）檢測	報告基因敲入細胞系	SNP芯片（限人和小鼠來源樣本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色	CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
原位雜交	基因敲除大鼠/小鼠
熒光原位雜交	基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等）
行為學檢測	藥物篩選服務項目	藥效學評價
水迷宮實驗	高通量自動藥物篩選平臺	神經系統藥物藥效學評價
曠場實驗	細胞高內涵藥物篩選平臺	抗腫瘤藥物藥效學評價
重復性刻板行為檢測	蛋白質組學靶標研發平臺	心血管系統藥物藥效學評價
動物跑臺檢測	分子藥理研究平臺	泌尿系統藥物藥效學評價
強迫游泳	生物膜片鉗藥物篩選平臺	內分泌系統藥物藥效學評價
	常規藥物體外篩選	抗炎免疫藥物藥效學評價

【本平臺合作項目】

分子生物學、細胞生物學、病理染色檢測、細胞敲除&敲入、模式與轉基因動物、SPF動物保種、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務！

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