2) Taq DNA polymerase used was P112-01.

 3) Two controls used in PCR genotyping are:

 ? Water control: No DNA template added.

 ? Wildtype control: 400 ng of mouse genomic DNA.  

6. Sequencing Confirmation

Sequencing Primer for PCR product:

Sequence primer (F1): 5’-GAAGCATTATCATTTGGTGGGAAC-3’

Sequencing Results:

Positive animals

Mouse ID: 2, 6 (Deleted 4961 bp and inserted 28 bp)

7. Breeding and Genotyping strategy

8. 配種與繁殖匯總

小鼠配種與繁殖情況如下圖所示。

（1）+/+為DNA雙鏈都含有XXX基因，即野生型小鼠；+/-為只有一條DNA鏈含有XXX基因，即雜合子小鼠；-/-為DNA雙鏈都不含XXX基因，即純合子小鼠。

       （2）紅色字體標記表示純合子小鼠，藍色字體標記表示小鼠已死亡。

      PCR鑒定

     （1）5/9，2#，6#鑒定。

     根據圖一，說明：2-1、6-1用引物F1/R1進行PCR；2-2、6-2用引物F1/R2進行PCR。鑒定結果：2#，6#為雜合子。

      （2）5/19，7#~13#鑒定。

       根據圖二，說明：前面是用引物F1/R1進行PCR；后面是用引物F1/R2進行PCR。鑒定結果：7#、9#、10#為純合子；11#、12#、13#為雜合子；8#為野生小鼠。其中11#引物F1/R1條帶不明顯，后續重新取材鑒定。